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登革熱IgG間接法檢測試劑盒

Panbio Dengue IgG Indirect ELISA 

產(chǎn)品目錄號01PE30

預期用途

Panbio Dengue IgG Indirect ELISA用于定性檢測登革熱病原血清型（1、2、3和4）血清中的IgG抗體，輔助臨床實驗室診斷出現(xiàn)臨床癥狀或既往感染登革熱病毒的患者。

概述

蟲媒病毒中的登革熱屬通過蚊子傳播，主要是埃及伊蚊和白紋伊蚊。 登革熱病毒感染，與傷寒病有關，其特征是突然發(fā)熱、劇烈頭痛、肌痛、關節(jié)痛和皮疹。 登革熱感染的嚴重并發(fā)癥包括登革出血熱和登革休克綜合征。此類并發(fā)癥的發(fā)病率增加與繼發(fā)性感染不同登革熱血清型有關。

通過ELISA對四種登革熱血清型的IgG類特異性抗體進行檢測，是一種診斷既往感染登革熱病毒的患者的重要方法。 配對血清中IgG， 水平不斷升高是活動性登革熱感染的表現(xiàn)。傳統(tǒng)上，血凝抑制試驗（HAI）滴度被用于劃分原發(fā)性或繼發(fā)性感染。當前的界定方法是采用及時分離至少7天的配對血清標本檢測，急性標本的HAI滴度≥ 1:2560被認為患者感染了繼發(fā)性黃病毒¹。

檢測原理

血清中存在的登革熱病毒抗體，與微孔測試條上聚苯乙烯表面附著的登革熱抗原結合物相結合。 洗去剩余的血清并添加過氧化物酶標記的抗人IgG抗體。清洗微孔，再添加無色的底物系統(tǒng) - 四甲基聯(lián)苯胺/過氧化氫（TMB顯色液）。底物被酶水解后，顯色液變藍。用酸終止反應后，TMB變黃。顯色表示測試樣本中存在登革熱IgG抗體。

提供的材料

• 登革熱抗原（血清型1、2、3和4）包被微孔板-（12x8孔）。即用型。未使用的微孔應該立即重新密封并儲存于干燥環(huán)境中。有效期內(nèi)儲存于2-8℃可保持穩(wěn)定。
• 清洗緩沖液（20倍） - 1瓶，60mL 20倍濃縮磷酸鹽緩沖鹽水（pH 7.2 – 7.6），含吐溫 20和防腐劑（0.1% Proclin™）。低溫可能結晶。若去除結晶，可在37℃孵育液體至澄清。混合均勻。用19體積的蒸餾水稀釋1體積的清洗緩沖液。稀釋后的緩沖液可在2-25℃儲存一周。
• 樣本稀釋劑 – 2瓶， 50 mL（粉色）。即用型。Tris緩沖生理鹽水（pH 7.2 – 7.6），含防腐劑（0.1% Proclin™）和添加劑。有效期內(nèi)儲存于2-8℃可保持穩(wěn)定。
• HRP標記抗人IgG – 1瓶，15mL（綠色）。即用型。辣根過氧化物酶（HRP）標記山羊抗人IgG，含防腐劑（0.1% Proclin™）和蛋白穩(wěn)定劑。有效期內(nèi)儲存于2-8℃可保持穩(wěn)定。
• TMB顯色液（TMB） - 1瓶，15mL。即用型。3,3’,5,5'-四甲基聯(lián)苯胺和過氧化氫的混合物，存放于枸櫞酸鹽緩沖液中（pH 3.5 – 3.8）。有效期內(nèi)儲存于2-8℃可保持穩(wěn)定。
• 陽性質(zhì)控品 – 1瓶，紅色瓶蓋，200μL人血清（含0.1%疊氮話鈉和0.005%硫酸慶大霉素）。有效期內(nèi)儲存于2-8℃可保持穩(wěn)定。
•  校準品 – 1瓶，黃色瓶蓋，850μL人血清（含0.1%疊氮話鈉和0.005%硫酸慶大霉素）。有效期內(nèi)儲存于2-8℃可保持穩(wěn)定。
• 陰性質(zhì)控品 – 1瓶，綠色瓶蓋，200μL人血清（含0.1%疊氮話鈉和0.005%硫酸慶大霉素）。有效期內(nèi)儲存于2-8℃可保持穩(wěn)定。
• 終止液 – 1瓶，紅色瓶蓋，15mL。即用型。1M磷酸。有效期內(nèi)儲存于2-25℃可保持穩(wěn)定。

Proclin™ 300是Rohm 和Haas公司的注冊商標。

需要但未提供的材料

• 精確、可調(diào)節(jié)的微量移液器，含一次性吸液頭（5-1000 μL容積）
• 去離子水
• 標板清洗系統(tǒng)
• 酶標儀，含450nm濾波器
• 計時器
• 刻度量筒
• 燒瓶
• 試管或微滴定板，用于稀釋血清

注意事項

用于體外診斷

• 在制備質(zhì)控品的過程中使用的所有人源性材料已經(jīng)過人類免疫缺陷病毒1/2（HIV 1 /2）抗體、丙肝（HCV）和乙肝表面抗原的檢測，結果為陰性。但是，任何測試方法都不能*確信，且所有人源性質(zhì)控品和抗原包被微孔板都應按照潛在傳染性材料處理。疾病控制和預防中心以及美國國立衛(wèi)生研究院建議將潛在傳染原按照生物安全二級²處理。
• 該測試只能使用血清執(zhí)行。尚未建立使用全血、血漿或其它標本基質(zhì)的方法。
• 不可使用黃疸或脂血癥血清，以及出現(xiàn)溶血或微生物生長的血清。
• 不可加熱，否則血清將失去活性。
• 在開始檢測前所有試劑必須平衡至室溫（20-25℃）。檢測受溫度變化的影響。微孔板在達到室溫（20-25℃）之前不可從密封袋中取出。
• 直接用干凈的吸液頭從試劑瓶中吸出試劑。轉(zhuǎn)移試劑可能導致污染。
• 未使用的微孔應該立即重新密封并儲存于干燥環(huán)境中。否則將產(chǎn)生錯誤結果。
• 底物系統(tǒng)：
  • 由于TMB易受金屬離子的污染，所以底物系統(tǒng)不能與金屬表面接觸。
  • 避免長時間陽光直射。
  • 有些清潔劑可干擾TMB的性能。
• TMB可能呈現(xiàn)淡藍色，這不影響底物的活性或測定結果。累積。
• 疊氮話鈉還抑制酶標物的活性。在添加酶標物時必須使用干凈的吸液頭，避免攜帶其它試劑的疊氮話鈉。

登革熱IgG間接法檢測試劑盒